Ny nematode kesika dia endoparasite mpifindra monina any an-toerana fantatra fa miteraka fatiantoka ara-toekarena goavana amin'ny tontolo iainana ala kesika. Ny fandinihana amin'izao fotoana izao dia mandinika ny asan'ny nematicidal amin'ny indoles halogenated amin'ny nematodes pine sy ny fomba fiasany. Ny hetsika nematicidal an'ny 5-iodoindole sy avermectin (fanaraha-maso tsara) amin'ny nematodes kesika dia mitovy ary avo amin'ny fifantohana ambany (10 μg / mL). Ny 5-iodoindole dia mampihena ny fecundity, ny asa fananahana, ny fahafatesan'ny embryon sy ny olitra, ary ny fitondran-tena. Ny fifandraisan'ny molekiola amin'ny ligand miaraka amin'ny glutamate-gated chloride channel receptors manokana dia manohana ny fiheverana fa ny 5-iodoindole, toy ny avermectin, dia mifatotra mafy amin'ny tranokala mavitrika. 5-Iodoindole koa dia nahatonga ny fiovaovan'ny phenotypic isan-karazany amin'ny nematodes, anisan'izany ny firodanan'ny taova / fihenan'ny taova ary ny fitomboan'ny vacuolization. Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny vacuoles dia mety manana anjara toerana amin'ny fahafatesan'ny nematode methylation-mediated. Ny tena zava-dehibe dia ny 5-iodoindole dia tsy misy poizina ho an'ny karazana zavamaniry roa (laisoa sy radish). Noho izany, ity fanadihadiana ity dia mampiseho fa ny fampiharana iodoindole eo ambanin'ny toe-piainana tontolo iainana dia afaka mifehy ny faharatran'ny kesika.
Ny nematode hazo kesika (Bursaphelenchus xylophilus) dia an'ny nematode hazo kesika (PWN), nematode endoparasitika mpifindra monina fantatra fa miteraka fahasimbana ara-tontolo iainana mahery vaika amin'ny tontolo iainana ala kesika1. Ny aretin'ny kesika (PWD) vokatry ny nematode hazo kesika dia lasa olana goavana any amin'ny kaontinanta maro, anisan'izany i Azia sy Eoropa, ary any Amerika Avaratra, ny nematode dia manimba karazana kesika nampidirina1,2. Olana ara-toekarena lehibe ny fihenan'ny hazo kesika, ary mampanahy ny fahatsinjovana ny fiparitahany eran-tany3. Ireto karazana kesika ireto no tena asian'ny nematode: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, ary Pinus radiata4. Ny nematode pine dia aretina mafy izay mety hamono ny hazo kesika ao anatin'ny herinandro na volana maromaro aorian'ny otrikaretina. Fanampin'izany, ny fihanaky ny nematode kesika dia fahita any amin'ny tontolo iainana isan-karazany, noho izany dia napetraka ny rojo otrikaretina maharitra1.
Bursaphelenchus xylophilus dia nematode parasitika zava-maniry ao an-trano ao amin'ny fianakaviana lehibe Aphelenchoidea sy clade 102.5. Ny nematode dia mihinana holatra ary miteraka ao amin'ny vatan'ny hazo kesika, mivoatra ho dingana efatra samihafa: L1, L2, L3, L4 ary olon-dehibe1,6. Ao anatin'ny toe-javatra tsy fahampian-tsakafo, ny nematode kesika dia miditra amin'ny dingana manokana amin'ny larva - dauer, izay manaparitaka ny vector azy - ny voangory hodi-kazo (Monochamus alternatus) ary afindra any amin'ny hazo kesika salama. Ao amin'ny mpampiantrano salama, ny nematodes dia mifindra monina haingana amin'ny tadin'ny zavamaniry ary mihinana amin'ny sela parenchymatous, izay mitarika ho amin'ny fanehoan-kevitry ny hypersensitivity, ny kesika ary ny fahafatesana ao anatin'ny herintaona aorian'ny aretina1,7,8.
Fanamby hatry ny ela ny fanaraha-maso biolojika ny nematode kesika, miaraka amin'ny fepetra fanagadrana efa hatramin'ny taonjato faha-20. Ny paikady amin'izao fotoana izao amin'ny fifehezana ny nematodes kesika dia ahitana fitsaboana simika indrindra, ao anatin'izany ny fandoroana hazo sy ny fametrahana nematicides ao anaty vatan-kazo. Ny nematicides be mpampiasa indrindra dia avermectin sy avermectin benzoate, izay an'ny fianakaviana avermectin. Ireo akora simika lafo vidy ireo dia tena mandaitra amin'ny karazana nematode maro ary heverina ho azo antoka amin'ny tontolo iainana9. Na izany aza, ny fampiasana miverimberina an'ireo nematicides ireo dia antenaina hamorona fanerena fifantenana izay azo antoka fa hitarika amin'ny firongatry ny nematodes kesika mahatohitra, toy ny naseho tamin'ny bibikely bibikely maro, toy ny Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella ary ny nematodes Trichostrongylus colubriformis sy Ostertagia circumcincta, izay nitombo tsikelikely ny fanoherana. avermectins10,11,12. Noho izany, mila mianatra tsy tapaka ny lamina fanoherana ary tsy mitsahatra ny fitiliana ny nematicides mba hahitana fepetra hafa, lafo ary mitsinjo ny tontolo iainana hifehezana ny PVD. Tao anatin'ny folo taona faramparany, mpanoratra maromaro no nanolotra ny fampiasana ny fitrandrahana zavamaniry, ny menaka manan-danja ary ny volatiles ho toy ny mpitsabo nematode 13,14,15,16.
Nasehonay vao haingana ny hetsika nematicidal an'ny indole, molekiola famantarana intercellular sy interkingdom, ao amin'ny Caenorhabditis elegans 17. Indole dia famantarana intracellular miely patrana amin'ny ekolojia mikraoba, mifehy ny asa maro izay misy fiantraikany amin'ny fizika mikraoba, ny fananganana spora, ny fahamarinan'ny plasmid, ny fanoherana ny zava-mahadomelina, ny fananganana biofilm, ary ny virulence 18, 19. Ny asan'ny indole sy ny derivatives amin'ny nematodes pathogen hafa dia tsy nodinihina. Ao anatin'ity fanadihadiana ity, dia nanadihady ny hetsika nematicidal an'ny 34 indole amin'ny nematodes kesika izahay ary nanazava ny fomba fiasan'ny 5-iodoindole mahery indrindra amin'ny alàlan'ny microscopie, sary tsy ara-potoana, ary andrana docking molekiola, ary nanombantombana ny voka-dratsiny amin'ny zavamaniry amin'ny alàlan'ny fitsirihana voa.
Ny fifantohana avo (> 1.0 mM) amin'ny indole dia voalaza fa misy fiantraikany nematicidal amin'ny nematodes17. Taorian'ny fitsaboana ny B. xylophilus (dingan'ny fiainana mifangaro) miaraka amin'ny indole na 33 samihafa indole derivatives amin'ny 1 mM, ny fahafatesan'ny B. xylophilus dia refesina amin'ny fanisana ny nematodes velona sy maty ao amin'ny vondrona fanaraha-maso sy voatsabo. Indole dimy no nampiseho hetsika nematicidal lehibe; ny fahaveloman'ny vondrona mpanara-maso tsy voatsabo dia 95 ± 7% taorian'ny 24 ora. Amin'ireo indole 34 nosedraina, ny 5-iodoindole sy 4-fluoroindole amin'ny 1 mM dia niteraka fahafatesan'ny 100%, fa ny 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate ary 7-iodoindole dia nahatonga ny fahafatesan'ny 50% teo ho eo (Table 1).
Ny fiantraikan'ny 5-iodoindole amin'ny fananganana vacuole sy ny metabolism ny nematode hazo kesika. (A) Ny fiantraikan'ny avermectin sy 5-iodoindole amin'ny nematodes lahy lehibe, (B) atody nematode dingana L1 ary (C) metabolism ny B. xylophilus, (i) tsy voamarika ny vacuoles amin'ny 0 h, ny fitsaboana dia niteraka (ii) vacuoles, (iii) fanangonana ny vacuoles maromaro, (iv) fusions ny vacuoles, (iv) fusions. (vi) fananganana vacuole goavambe. Ny zana-tsipìka mena dia manondro ny fivontosan'ny vacuoles, ny zana-tsipìka manga dia manondro ny fifangaroan'ny vacuoles ary ny zana-tsipìka mainty dia manondro vacuoles goavambe. Scale bar = 50 μm.
Fanampin'izany, ity fanadihadiana ity dia nanoritsoritra ny fizotry ny fizotry ny fahafatesan'ny metanina amin'ny nematodes pine (sary 4C). Ny fahafatesan'ny metanôgène dia karazana fahafatesan'ny sela tsy apoptotika mifandray amin'ny fanangonan'ny vacuoles cytoplasmique malaza27. Ny kilema ara-nofo hita ao amin'ny nematode kesika dia toa mifandray akaiky amin'ny rafitry ny fahafatesan'ny metanina. Ny fandinihana mikroskopika amin'ny fotoana samihafa dia nampiseho fa nisy vacuole goavambe niforona taorian'ny 20 ora nipoitra tamin'ny 5-iodoindole (0.1 mM). Ny vacuole mikroskopika dia hita taorian'ny 8 ora fitsaboana, ary nitombo ny isan'izy ireo taorian'ny 12 ora. Vacuoles lehibe maromaro no hita taorian'ny 14 ora. Vacuoles mitambatra maromaro no hita mazava tsara taorian'ny 12-16 h fitsaboana, izay manondro fa ny fusionan'ny vacuole no fototry ny mekanika fahafatesan'ny metanôgène. Taorian'ny 20 ora dia nisy vacuole goavambe maromaro hita manerana ny kankana. Ireo fanamarihana ireo dia maneho ny tatitra voalohany momba ny metuosis ao amin'ny C. elegans.
Ao amin'ny kankana 5-iodoindole voatsabo, dia voamarika ihany koa ny fivondronan'ny vacuole sy ny fahatapahan'ny (sary 5), araka ny asehon'ny fiondrehan'ny kankana sy ny famoahana vacuole amin'ny tontolo iainana. Ny fikorontanan'ny vacuole ihany koa dia voamarika tao amin'ny fonon'ny akorandriaka, izay voatahiry amin'ny ankapobeny ny L2 mandritra ny foy (Fig. S2 fanampiny). Ireo fandinihana ireo dia manohana ny fandraisan'anjaran'ny fluid accumulatory sy ny tsy fahombiazan'ny osmoregulatory, ary koa ny ratra amin'ny sela (RCI), amin'ny dingan'ny fananganana vacuole sy suppuration (sary 5).
Nanadihady ny asan'ny nematicidal ny sodium iodide (NaI) sy ny potassium iodide (KI) ny fikatsahana ny anjara asan'ny iodine amin'ny fananganana vacuole hita. Na izany aza, amin'ny fifantohana (0.1, 0.5 na 1 mM), dia tsy misy fiantraikany amin'ny fahaveloman'ny nematode na ny fananganana vacuole (fanampiny sary S5), na dia nisy fiantraikany nematicidal kely aza ny 1 mM KI. Amin'ny lafiny iray, ny 7-iodoindole (1 na 2 mM), toy ny 5-iodoindole, dia nahatonga vacuoles maro sy fikorontanana ara-drafitra (Fig. S6 fanampiny). Ireo iodoindoles roa dia naneho toetra feno phenotypic mitovy amin'ny nematodes pine, fa ny NaI sy KI dia tsy. Mahaliana fa indole dia tsy nahatonga ny fananganana vacuole ao amin'ny B. xylophilus amin'ny fifantohana nosedraina (tsy aseho ny data). Noho izany, ny valiny dia nanamafy fa ny indole-iode complex dia tompon'andraikitra amin'ny vacuolization sy ny metabolism ny B. xylophilus.
Anisan'ireo indole nosedraina ho an'ny hetsika nematicidal, ny 5-iodoindole dia manana ny mari-pamantarana avo indrindra amin'ny -5.89 kcal / mol, arahin'ny 7-iodoindole (-4.48 kcal / mol), 4-fluoroindole (-4.33), ary indole (-4.03) (sary 6). Ny fatoran'ny hidrôzenina amin'ny hazondamosina matanjaka amin'ny 5-iodoindole amin'ny leucine 218 dia manamafy ny fatorany, fa ny derivatives indole hafa rehetra dia mifatotra amin'ny serine 260 amin'ny alàlan'ny fatorana hidrozenina amin'ny sisiny. Anisan'ireo iodoindoles modely hafa, ny 2-iodoindole dia manana sanda mamatotra -5,248 kcal / mol, izay noho ny fatorany hydrogène lehibe amin'ny leucine 218. Ny fatorana hafa fantatra dia ahitana 3-iodoindole (-4,3 kcal / mol), 4-iodoindole (-4,0 kcal / mol), ary (6-2. S8). Ny ankamaroan'ny indole halogenated sy indole mihitsy, afa-tsy ny 5-iodoindole sy 2-iodoindole, dia mamorona fifamatorana amin'ny serine 260. Ny zava-misy fa ny fifamatorana amin'ny hydrogène amin'ny leucine 218 dia manondro ny fatoran'ny ligan-receptor mahomby, araka ny voamarika ho an'ny ivermectin (Fig. S7 fanampiny), dia manamafy fa ny 5-iodole, toy ny 5-iodole, indoctin, indole, indole, indole, 2-iodole. mamatotra mafy ny toerana mavitrika amin'ny GluCL receptor amin'ny alalan'ny leucine 218 (sary 6 sy fanampiny S8). Manolo-kevitra izahay fa io fatorana io dia ilaina amin'ny fitazonana ny firafitry ny pore misokatra amin'ny komplex GluCL ary amin'ny alàlan'ny famatorana mafy amin'ny toerana mavitrika amin'ny receptor GluCL, 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ary ivermectin dia mitazona ny fantsona ion misokatra ary mamela ny fivoahan'ny fluid.
Molecular docking ny indole sy halogenated indole amin'ny GluCL. Ny orientation mamatotra ny (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, ary (D) 5-iodoindole ligy mankany amin'ny toerana mavitrika amin'ny GluCL. Ny proteinina dia aseho amin'ny kofehy iray, ary ny fatorana hydrogène amin'ny taolam-paty dia aseho amin'ny tsipika misy teboka mavo. Ny (A′), (B′), (C′), ary (D′) dia mampiseho ny fifandraisan'ireo ligy mifanitsy amin'ireo sisa tavela amin'ny asidra amine manodidina, ary ny fatorana hidrozenina misy rojo sisiny dia aseho amin'ny zana-tsipìka misy teboka mavokely.
Nisy ny fanandramana natao hanombanana ny voka-dratsin'ny 5-iodoindole amin'ny fitsimohan'ny voan'ny laisoa sy ny radish. 5-iodoindole (0,05 na 0,1 mM) na avermectin (10 μg/mL) dia nisy fiantraikany kely na tsy nisy fiantraikany tamin'ny fitsimohany voalohany sy ny fiposahan'ny zavamaniry (sary 7). Ankoatra izany, tsy nisy fahasamihafana lehibe hita teo amin'ny tahan'ny fitsimohany ny fanaraha-maso tsy voatsabo sy ny voa voa tsaboina amin'ny 5-iodoindole na avermectin. Ny fiantraikany amin'ny fanitarana ny taproot sy ny isan'ny fakany miforona dia tsy dia misy dikany, na dia 1 mM (10 heny amin'ny fifantohana mavitrika) amin'ny 5-iodoindole aza dia nanemotra kely ny fivoaran'ny fakany. Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny 5-iodoindole dia tsy misy poizina amin'ny selan'ny zavamaniry ary tsy manelingelina ny fizotran'ny fivoaran'ny zavamaniry amin'ny fifantohana nodinihina.
Ny fiantraikan'ny 5-iodoindole amin'ny fitsirian'ny voa. Ny fitsimohany, ny fitsimoka ary ny fakany an-tsisin'ny voan'ny B. oleracea sy R. raphanistrum amin'ny media Murashige sy Skoog agar misy na tsy misy avermectin na 5-iodoindole. Ny fitsimohany dia voarakitra ao anatin'ny 3 andro incubation amin'ny 22 ° C.
Ity fanadihadiana ity dia mitatitra tranga maromaro momba ny famonoana nematode amin'ny indole. Ny tena zava-dehibe dia ity no tatitra voalohany momba ny iodoindole mampirisika ny methylation (dingana vokatry ny fivondronan'ny vacuoles kely izay mitambatra tsikelikely ho vacuoles goavam-be, amin'ny farany mitarika ho amin'ny fahatapahan'ny membrane sy ny fahafatesana) amin'ny fanjaitra kesika, miaraka amin'ny iodoindole mampiseho toetra nematicidal manan-danja mitovy amin'ny an'ny avermectin nematicide ara-barotra.
Indoles dia voalaza teo aloha fa manao asa famantarana maromaro amin'ny prokaryotes sy eukaryotes, anisan'izany ny fanakanana / fananganana biofilm, ny fahaveloman'ny bakteria, ary ny pathogenicity19,32,33,34. Vao haingana, ny mety ho fiantraikan'ny fitsaboana amin'ny halogenated indole, indole alkaloids, ary ny semisynthetic indole derivatives dia nahasarika fikarohana be dia be35,36,37. Ohatra, ny indoles halogenated dia hita fa mamono ny Escherichia coli sy Staphylococcus aureus sela37. Fanampin'izany, mahaliana ara-tsiansa ny fandalinana ny fahombiazan'ny indole halogenated amin'ny karazana, genera ary fanjakana hafa, ary ity fandalinana ity dia dingana iray mankany amin'ny fanatrarana io tanjona io.
Eto izahay dia manolotra mekanika ho an'ny 5-iodoindole-induced lethality ao amin'ny C. elegans mifototra amin'ny fahasimban'ny sela (RCI) sy ny methylation (sary 4C sy 5). Ny fiovan'ny edema toy ny fivontosana sy ny fihenan'ny vacuolar dia famantarana ny RCI sy ny methylation, miseho ho vacuole goavambe ao amin'ny cytoplasm48,49. Ny RCI dia manelingelina ny famokarana angovo amin'ny alàlan'ny fampihenana ny famokarana ATP, mahatonga ny tsy fahombiazan'ny paompy ATPase, na ny fanakorontanana ny sela sela ary ny fidiran'ny Na +, Ca2 + ary ny rano50,51,52 haingana. Ny vacuoles intracytoplasmique dia mipoitra ao amin'ny selan'ny biby vokatry ny fivondronan'ny fluid ao amin'ny cytoplasm noho ny fidiran'ny Ca2+ sy ny rano53. Mahaliana fa ity fomba fiasa manimba ny sela ity dia azo ovaina raha mihelina ny fahasimbana ary manomboka mamokatra ATP mandritra ny fotoana voafetra ny sela, fa raha mitohy na miharatsy ny fahasimbana dia maty ny sela.54 Ny fandinihanay dia mampiseho fa ny nematode tsaboina amin'ny 5-iodoindole dia tsy afaka mamerina ny biosynthesis ara-dalàna aorian'ny fiposahan'ny adin-tsaina.
Ny phenotype methylation nateraky ny 5-iodoindole ao amin'ny B. xylophilus dia mety noho ny fisian'ny iodine sy ny fizarana molekiola, satria ny 7-iodoindole dia tsy dia misy fiantraikany amin'ny B. xylophilus noho ny 5-iodoindole (Table 1 sy Supplementary Figure S6). Ireo vokatra ireo dia mifanaraka amin'ny fandalinana ny Maltese et al. (2014), izay nitatitra fa ny fandikana ny pyridyl nitrogen moiety amin'ny indole avy amin'ny para- mankany amin'ny meta-toerana dia nanafoana ny vacuolization, ny fihenan'ny fitomboana, ary ny cytotoxicity ao amin'ny sela U251, izay manoro hevitra fa ny fifandraisana amin'ny molekiola amin'ny tranokala mavitrika manokana ao amin'ny proteinina dia critical27,44,45. Ny fifandraisana misy eo amin'ny indole na halogenated indole sy ny mpitsabo GluCL hita amin'ity fanadihadiana ity dia manohana io hevitra io ihany koa, satria ny 5- sy 2-iodoindole dia hita fa mifamatotra amin'ny receptors GluCL kokoa noho ireo indole hafa nodinihina (sary 6 sy Supplementary Figure S8). Ny iodine eo amin'ny toerana faharoa na fahadimy amin'ny indole dia hita fa mifatotra amin'ny leucine 218 amin'ny receptor GluCL amin'ny alàlan'ny fatorana hydrogen backbone, fa ny indole halogenated hafa sy ny indole dia mamorona fatorana hidrozenina malemy miaraka amin'ny serine 260 (sary 6). Noho izany dia manombatombana izahay fa ny toerana misy ny halogen dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny fampidinana ny fahapotehan'ny vacuolar, fa ny fatorana mafy ny 5-iodoindole dia mitazona ny fantsona ion misokatra, ka mamela ny fidiran'ny fluid haingana sy ny fahatapahan'ny vacuole. Na izany aza, mbola tsy fantatra ny fomba fiasan'ny 5-iodoindole amin'ny antsipiriany.
Alohan'ny fampiharana azo ampiharina ny 5-iodoindole dia tokony hojerena ny fiantraikany misy poizina amin'ny zavamaniry. Ny fanandramana fitsimohany voa dia nampiseho fa ny 5-iodoindole dia tsy nisy fiantraikany ratsy teo amin'ny fitsirian'ny voa na ny fizotran'ny fivoarana manaraka tamin'ny fifantohana nodinihina (sary 7). Noho izany, ity fanadihadiana ity dia manome fototra ho an'ny fampiasana 5-iodoindole amin'ny tontolo iainana ara-tontolo iainana mba hifehezana ny fahasimban'ny nematode kesika amin'ny hazo kesika.
Ny tatitra teo aloha dia naneho fa ny fitsaboana mifototra amin'ny indole dia maneho fomba iray mety hamahana ny olan'ny fanoherana antibiotika sy ny fivoaran'ny homamiadana55. Ankoatr'izay, ny indole dia manana hetsika antibakteria, antikansera, antioxidant, anti-inflammatoire, antidiabetika, antiviral, antiproliferative ary antituberculose ary mety ho fototra mampanantena ny fampivoarana ny zava-mahadomelina56,57. Ity fanadihadiana ity dia manolotra voalohany ny mety ho fampiasana iodine ho toy ny antiparasitika sy anthelmintic agent.
Hita telopolo taona lasa izay ny Avermectin ary nahazo ny loka Nobel tamin'ny 2015, ary mbola mitohy ny fampiasana azy amin'ny maha-anthelmintic azy. Na izany aza, noho ny fivoarana haingana ny fanoherana ny avermectins amin'ny nematodes sy ny bibikely bibikely, dia ilaina ny paikadin'ny hafa, mora, ary miaro ny tontolo iainana mba hifehezana ny fihanaky ny PWN amin'ny hazo kesika. Ity fanadihadiana ity dia mitatitra ihany koa ny fomba famonoana ny nematodes kesika ny 5-iodoindole ary ny 5-iodoindole dia manana poizina ambany amin'ny selan'ny zavamaniry, izay manokatra fahatsinjovana tsara ho an'ny fampiharana ara-barotra ho avy.
Ny fanandramana rehetra dia nankatoavin'ny Komitin'ny Etika ao amin'ny Anjerimanontolon'i Yeungnam, Gyeongsan, Korea, ary ny fomba dia natao araka ny torolalan'ny Komitin'ny Etika ao amin'ny Oniversite Yeungnam.
Ny andrana fanaterana atody dia natao tamin'ny alalan'ny fomba fiasa43. Mba hanombanana ny tahan'ny foy (HR), nematode lehibe 1 andro (vehivavy 100 eo ho eo ary lahy 100) dia nafindra tany amin'ny lovia Petri misy ny holatra ary navela hitombo mandritra ny 24 ora. Avy eo dia natokana ny atody ary notsaboina tamin'ny 5-iodoindole (0,05 mM sy 0,1 mM) na avermectin (10 μg / ml) ho fampiatoana amin'ny rano voadio sterile. Ireo fampiatoana ireo (500 μl; atody 100 eo ho eo) dia nafindra tany amin'ny lava-drano misy takelaka kolontsaina 24-lavaka ary natsofoka tamin'ny 22 ° C. Ny fanisana L2 dia natao taorian'ny 24 ora nanaovana incubation saingy heverina fa maty raha toa ka tsy mihetsika ny sela rehefa notarihan'ny tariby platinum tsara. Ity andrana ity dia natao tamin'ny dingana roa, izay samy nisy famerimberenana enina. Ny angona avy amin'ny fanandramana roa dia natambatra ary naseho. Ny isan-jaton'ny HR dia kajy toy izao manaraka izao:
Ny fahafatesan'ny larva dia nodinihina tamin'ny fampiasana fomba fiasa efa novolavolaina teo aloha. Nangonina ny atodin'ny nematode ary ny embryon dia natambatra tamin'ny alalan'ny foy tao anaty rano voadio sterile mba hamoronana olitra dingana L2. Notsaboina tamin'ny 5-iodoindole (0,05 mM sy 0,1 mM) na avermectin (10 μg/ml) na avermectin (10 μg/ml) ny olitra synchronized (nematodes 500 eo ho eo) ary nobeazina tamin'ny takelaka B. cinerea Petri. Taorian'ny 48 h ny incubation amin'ny 22 ° C, nematodes dia nangonina ao amin'ny sterile distilled rano ary nandinika ny fisian'ny L2, L3, ary L4 dingana. Ny fisian'ny dingana L3 sy L4 dia manondro ny fiovan'ny larva, fa ny fisian'ny dingana L2 kosa dia manondro fa tsy misy fiovana. Ny sary dia azo tamin'ny alàlan'ny iRiS™ Digital Cell Imaging System. Ity andrana ity dia natao tamin'ny dingana roa, izay samy nisy famerimberenana enina. Ny angona avy amin'ny fanandramana roa dia natambatra ary naseho.
Ny poizina amin'ny 5-iodoindole sy avermectin amin'ny voa dia nodinihina tamin'ny alalan'ny fitsapana fitsimohany amin'ny takelaka Murashige sy Skoog agar.62 B. oleracea sy R. raphanistrum voa dia nototofana voalohany tamin'ny rano distille sterile nandritra ny iray andro, nosasana tamin'ny 1 ml 100% ethanol, sterilized amin'ny chlorite 1 ml 50% ara-barotra. minitra, ary nosasana in-dimy tamin`ny rano sterile 1 ml. Ny masomboly sterilized dia notsindriana teo amin'ny takelaka agar-agar misy 0,86 g/l (0,2X) Murashige sy Skoog medium ary 0,7% bacteriological agar misy na tsy misy 5-iodoindole na avermectin. Avy eo dia natsofoka tamin'ny 22 ° C ny takelaka, ary nalaina sary rehefa afaka 3 andro. Ity andrana ity dia natao tamin'ny dingana roa, izay samy nisy famerimberenana enina.
Fotoana fandefasana: Feb-26-2025