Ny nematode kesika dia endoparasite mpifindra monina mandritra ny fanokanan-toerana izay fantatra fa miteraka fatiantoka ara-toekarena goavana ao amin'ny tontolo iainana ala kesika. Ity fanadihadiana ity dia mandinika ny asan'ny nematicidal an'ny indole halogenated amin'ny nematode kesika sy ny fomba fiasany. Mitovy ary avo ny asan'ny nematicidal an'ny 5-iodoindole sy avermectin (fanaraha-maso tsara) amin'ny nematode kesika amin'ny fifantohana ambany (10 μg/mL). Ny 5-iodoindole dia nampihena ny fahavokarana, ny asan'ny fananahana, ny fahafatesan'ny embryon sy larval, ary ny fitondran-tena locomotor. Ny fifandraisana molekioleran'ny ligands amin'ny receptors fantsona klôro glutamate-gated manokana amin'ny invertebrate dia manohana ny hevitra fa ny 5-iodoindole, toy ny avermectin, dia mifamatotra mafy amin'ny toerana mavitrika amin'ny receptor. Ny 5-Iodoindole koa dia niteraka fiovaovan'ny phenotypic isan-karazany tamin'ny nematode, anisan'izany ny firodanan'ny taova/fihenan'ny taova tsy ara-dalàna ary ny fitomboan'ny vacuolization. Ireo valiny ireo dia manondro fa ny vacuoles dia mety mitana anjara toerana amin'ny fahafatesana vokatry ny methylation nematode. Zava-dehibe ny mahafantatra fa tsy nisy poizina ho an'ny karazana zavamaniry roa (laisoa sy radi) ny 5-iodoindole. Noho izany, ity fanadihadiana ity dia mampiseho fa ny fampiharana ny iodoindole amin'ny toe-javatra misy ny tontolo iainana dia afaka mifehy ny fahasimban'ny hazo kesika.
Ny nematode hazo kesika (Bursaphelenchus xylophilus) dia anisan'ny nematode hazo kesika (PWN), nematode endoparasitika mpifindra monina fantatra fa miteraka fahasimbana ara-tontolo iainana mafy amin'ny tontolo iainana ala kesika1. Ny aretin'ny hazo kesika (PWD) vokatry ny nematode hazo kesika dia lasa olana lehibe any amin'ny kaontinanta maro, anisan'izany i Azia sy Eoropa, ary any Amerika Avaratra, ny nematode dia manimba ny karazana kesika nampidirina1,2. Ny fihenan'ny hazo kesika dia olana ara-toekarena lehibe, ary mampanahy ny mety hisian'ny fiparitahany manerantany3. Ireto karazana kesika manaraka ireto no tena voatafika indrindra amin'ny nematode: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, ary Pinus radiata4. Ny nematode hazo kesika dia aretina lehibe izay mety hamono ny hazo kesika ao anatin'ny herinandro na volana aorian'ny aretina. Ankoatra izany, ny fihanaky ny nematode kesika dia mahazatra amin'ny tontolo iainana isan-karazany, ka efa napetraka ny rojo aretina maharitra1.
Ny Bursaphelenchus xylophilus dia nematode katsentsitra zavamaniry ao amin'ny fianakaviana Aphelenchoidea sy clade 102.5. Mihinana holatra ny nematode ary miteraka ao amin'ny vatan'ny hazo kesika, ka mivoatra ho dingana efatra samihafa amin'ny larva: L1, L2, L3, L4 ary olon-dehibe1,6. Rehefa tsy ampy sakafo ny nematode kesika dia miditra amin'ny dingana larva manokana - dauer, izay miparitaka amin'ny bibikely mpitondra azy - ny voangory hodi-kazo kesika (Monochamus alternatus) ary afindra any amin'ny hazo kesika salama. Ao amin'ny mpampiantrano salama, mifindra haingana amin'ny vatan'ny zavamaniry ny nematode ary mihinana sela parenchymatous, izay mitarika ho amin'ny fihetseham-po maro be, ny fahalovana ny kesika ary ny fahafatesana ao anatin'ny herintaona aorian'ny aretina1,7,8.
Efa ela no sarotra ny fanaraha-maso biolojika ny nematode kesika, ary nanomboka tamin'ny taonjato faha-20 ny fepetra fanokanan-toerana. Ny paikady ankehitriny amin'ny fanaraha-maso ny nematode kesika dia ny fitsaboana simika, anisan'izany ny fampidirana entona amin'ny hazo sy ny fametrahana nematode amin'ny vatan-kazo. Ny nematode ampiasaina matetika indrindra dia ny avermectin sy ny avermectin benzoate, izay an'ny fianakaviana avermectin. Ireo akora simika lafo vidy ireo dia tena mandaitra amin'ny karazana nematode maro ary heverina ho azo antoka ho an'ny tontolo iainana9. Na izany aza, ny fampiasana miverimberina ireo nematode ireo dia antenaina hamorona tsindry fifantenana izay saika azo antoka fa hitarika amin'ny fipoiran'ny nematode kesika mahatohitra, araka ny efa naseho ho an'ny bibikely manimba maro, toy ny Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella ary ny nematode Trichostrongylus colubriformis sy Ostertagia circumcincta, izay nanjary nanohitra tsikelikely ny avermectins10,11,12. Noho izany, mila ianarana tsy tapaka ny lamina fanoherana ary mila jerena tsy tapaka ny nematode mba hahitana fepetra hafa, mahomby amin'ny vidiny ary sariaka amin'ny tontolo iainana hifehezana ny PVD. Tato anatin'ny am-polony taona vitsivitsy, mpanoratra maromaro no nanolotra ny fampiasana ny fitrandrahana avy amin'ny zavamaniry, menaka manitra ary akora mivaingana ho toy ny fanafody fanaraha-maso ny nematode13,14,15,16.
Vao haingana izahay no naneho ny fiasan'ny indole, molekiola famantarana intercellular sy interkingdom, ao amin'ny Caenorhabditis elegans 17. Ny indole dia famantarana intracellular miely patrana ao amin'ny ekolojia mikraoba, mifehy ny fiasa maro izay misy fiantraikany amin'ny fiziolojian'ny mikraoba, ny fiforonan'ny spore, ny fahamarinan'ny plasmid, ny fanoherana ny fanafody, ny fiforonan'ny biofilm, ary ny virulence 18, 19. Ny fiasan'ny indole sy ny vokatra azo avy aminy amin'ny nematodes pathogenic hafa dia tsy mbola nodinihina. Ato amin'ity fandalinana ity, dia nanadihady ny fiasan'ny indole 34 amin'ny nematodes kesika izahay ary nanazava ny fomba fiasan'ny 5-iodoindole mahery vaika indrindra amin'ny alàlan'ny mikroskopia, ny fakana sary amin'ny fotoana, ary ny fanandramana molekiola, ary nanombana ny fiantraikany poizina amin'ny zavamaniry amin'ny alàlan'ny fanadihadiana momba ny fitsimohan'ny voa.
Voalaza teo aloha fa misy fiantraikany amin'ny nematode ny fifantohana avo lenta (>1.0 mM). Taorian'ny fitsaboana ny B. xylophilus (dingana samihafa amin'ny fiainana) tamin'ny indole na derivatives indole 33 samihafa tamin'ny 1 mM, dia norefesina tamin'ny fanisana ny nematode velona sy maty tao amin'ny vondrona fanaraha-maso sy ny vondrona notsaboina ny fahafatesan'ny B. xylophilus. Indole dimy no naneho hetsika nematicidal manan-danja; ny fahaveloman'ny vondrona fanaraha-maso tsy voatsabo dia 95 ± 7% taorian'ny 24 ora. Tamin'ireo indole 34 nosedraina, ny 5-iodoindole sy 4-fluoroindole tamin'ny 1 mM dia nahatonga fahafatesana 100%, raha toa kosa ny 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, ary 7-iodoindole dia nahatonga fahafatesana 50% eo ho eo (Tabilao 1).
Fiantraikan'ny 5-iodoindole amin'ny fiforonan'ny vacuole sy ny metabolisman'ny nematode hazo kesika. (A) Fiantraikan'ny avermectin sy 5-iodoindole amin'ny nematode lahy lehibe, (B) atodin'ny nematode dingana L1 ary (C) metabolisman'ny B. xylophilus, (i) tsy hita ny vacuole tamin'ny 0 ora, ny fitsaboana dia niafara tamin'ny (ii) vacuole, (iii) fiangonan'ny vacuole maro, (iv) fivontosan'ny vacuole, (v) fampiraisana ny vacuole ary (vi) fiforonan'ny vacuole goavambe. Ny zana-tsipìka mena dia manondro ny fivontosan'ny vacuole, ny zana-tsipìka manga dia manondro ny fampiraisana ny vacuole ary ny zana-tsipìka mainty dia manondro ny vacuole goavambe. Bara mizana = 50 μm.
Ankoatra izany, ity fandalinana ity dia nanazava ihany koa ny dingana mifanesy amin'ny fahafatesana vokatry ny metana amin'ny nematoda kesika (Sary 4C). Ny fahafatesana metanogenika dia karazana fahafatesan'ny sela tsy apoptotic mifandraika amin'ny fiangonan'ny vacuoles cytoplasmic misongadina27. Ny lesoka ara-morfolojika hita amin'ny nematoda kesika dia toa mifandray akaiky amin'ny mekanisma fahafatesana vokatry ny metana. Ny fandinihana mikroskopika tamin'ny fotoana samihafa dia naneho fa nisy vacuoles goavambe niforona taorian'ny 20 ora niharan'ny 5-iodoindole (0.1 mM). Hita ny vacuoles mikroskopika taorian'ny 8 ora fitsaboana, ary nitombo ny isan'izy ireo taorian'ny 12 ora. Hita ny vacuoles lehibe maromaro taorian'ny 14 ora. Hita mazava tsara ny vacuoles maromaro nitambatra taorian'ny 12–16 ora fitsaboana, izay manondro fa ny fifangaroan'ny vacuole no fototry ny mekanisma fahafatesana metanogenika. Rehefa afaka 20 ora, dia hita ny vacuoles goavambe maromaro manerana ny kankana. Ireo fandinihana ireo dia maneho ny tatitra voalohany momba ny metuosis ao amin'ny C. elegans.
Tao amin'ireo kankana notsaboina tamin'ny 5-iodoindole, dia hita ihany koa ny fivondronan'ny vacuole sy ny fahatapahan'izy ireo (Sary 5), araka ny asehon'ny fihodin'ny kankana sy ny fivoahan'ny vacuole any amin'ny tontolo iainana. Hita ihany koa ny fikorontanan'ny vacuole tao amin'ny fonon'ny akoran'atody, izay matetika voatahiry tsara amin'ny L2 mandritra ny fiterahana (Sary Fanampiny S2). Ireo fandinihana ireo dia manohana ny fandraisan'anjaran'ny fivondronan'ny ranoka sy ny tsy fahombiazan'ny osmoregulatory, ary koa ny ratra amin'ny sela azo averina (RCI), amin'ny dingan'ny fananganana sy ny fivontosan'ny vacuole (Sary 5).
Nieritreritra ny anjara asan'ny iode amin'ny fiforonan'ny vacuole hita izahay, ary nanadihady ny fiasan'ny nematicidal an'ny sodium iodide (NaI) sy potassium iodide (KI). Na izany aza, amin'ny fifantohana (0.1, 0.5 na 1 mM), dia tsy nisy fiantraikany tamin'ny fahaveloman'ny nematode na ny fiforonan'ny vacuole izy ireo (Sary Fanampiny S5), na dia nanana fiantraikany nematicidal kely aza ny 1 mM KI. Etsy ankilany, ny 7-iodoindole (1 na 2 mM), toy ny 5-iodoindole, dia niteraka vacuole maro sy fiovaovan'ny rafitra (Sary Fanampiny S6). Ny iodoindole roa dia naneho toetra mitovy amin'ny phenotypic amin'ny nematode kesika, raha toa kosa ny NaI sy KI tsy nanao izany. Mahaliana fa ny indole dia tsy niteraka fiforonan'ny vacuole tao amin'ny B. xylophilus tamin'ny fifantohana nosedraina (tsy aseho ny angon-drakitra). Noho izany, ny valiny dia nanamafy fa ny complexe indole-iodine no tompon'andraikitra amin'ny vacuolization sy ny metabolisman'ny B. xylophilus.
Anisan'ireo indoles nosedraina ho an'ny asan'ny nematicidal, ny 5-iodoindole no nanana ny index slip ambony indrindra -5.89 kcal/mol, arahin'ny 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), ary indole (-4.03) (Sary 6). Ny fifamatorana hidrôzenina matanjaka eo amin'ny 5-iodoindole sy ny leucine 218 dia manamafy orina ny fifamatorany, raha toa kosa ireo indole hafa rehetra dia mifamatotra amin'ny serine 260 amin'ny alàlan'ny fifamatorana hidrôzenina rojo sisiny. Anisan'ireo iodoindole modely hafa, ny 2-iodoindole dia manana sanda fifamatorana -5.248 kcal/mol, izay noho ny fifamatorana hidrôzenina lehibe indrindra amin'ny leucine 218. Ny fifamatorana hafa fantatra dia ahitana ny 3-iodoindole (-4.3 kcal/mol), 4-iodoindole (-4.0 kcal/mol), ary 6-fluoroindole (-2.6 kcal/mol) (Sary Fanampiny S8). Ny ankamaroan'ny indole halogenated sy ny indole mihitsy, afa-tsy ny 5-iodoindole sy 2-iodoindole, dia mamorona fifamatorana amin'ny serine 260. Ny zava-misy fa ny fifamatorana hidrôzenina amin'ny leucine 218 dia manondro ny fifamatorana mahomby amin'ny receptor-ligand, araka ny hita amin'ny ivermectin (Sary Fanampiny S7), dia manamafy fa ny 5-iodoindole sy 2-iodoindole, toy ny ivermectin, dia mifamatotra mafy amin'ny toerana mavitrika amin'ny receptor GluCL amin'ny alàlan'ny leucine 218 (Sary 6 sy Sary Fanampiny S8). Manoro hevitra izahay fa ilaina io fifamatorana io mba hihazonana ny rafitra mason-koditra misokatra amin'ny complexe GluCL ary amin'ny alàlan'ny fifamatorana mafy amin'ny toerana mavitrika amin'ny receptor GluCL, ny 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ary ivermectin dia mitazona ny fantsona ion misokatra ary mamela ny fidiran'ny rano.
Fifamatorana molekiolan'ny indole sy ny indole halogenated amin'ny GluCL. Fironana mifamatotra amin'ny toerana mavitrika an'ny GluCL ny ligands (A), (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, ary (D) 5-iodoindole. Asehon'ny kofehy ny proteinina, ary aseho amin'ny tsipika mavo teboteboka ny fatoran'ny hidrôzenina ao amin'ny hazondamosina. Ny (A′), (B′), (C′), ary (D′) dia mampiseho ny fifandraisan'ny ligands mifanaraka amin'izany amin'ny asidra amine manodidina, ary ny fatoran'ny hidrôzenina rojo sisiny dia aseho amin'ny zana-tsipìka mavokely teboteboka.
Nisy andrana natao mba hanombanana ny fiantraikan'ny 5-iodoindole amin'ny fitsimoka ny voan'ny laisoa sy radi. Ny 5-iodoindole (0.05 na 0.1 mM) na avermectin (10 μg/mL) dia tsy nisy fiantraikany firy na tsy nisy fiantraikany mihitsy tamin'ny fitsimoka voalohany sy ny fipoiran'ny zana-kazo (Sary 7). Ankoatra izany, tsy nisy fahasamihafana lehibe hita teo amin'ny tahan'ny fitsimoka tamin'ireo voa tsy voatsabo sy ireo voa notsaboina tamin'ny 5-iodoindole na avermectin. Tsy dia nisy fiantraikany firy teo amin'ny fanalavana ny fakany sy ny isan'ny fakany ivelany niforona, na dia nanemotra kely ny fivoaran'ny fakany ivelany aza ny 1 mM (in-10 ny fifantohana mavitrika) an'ny 5-iodoindole. Ireo valiny ireo dia manondro fa ny 5-iodoindole dia tsy misy poizina amin'ny sela zavamaniry ary tsy manelingelina ny fizotran'ny fivoaran'ny zavamaniry amin'ny fifantohana nodinihina.
Fiantraikan'ny 5-iodoindole amin'ny fitsimohan'ny voa. Fitimohan'ny voa B. oleracea sy R. raphanistrum, mitsimoka ary mamaka avy amin'ny sisiny amin'ny fitaovana agar Murashige sy Skoog miaraka na tsy misy avermectin na 5-iodoindole. Noraketina ny fitsimohan'ny voa rehefa afaka 3 andro niorim-paka tamin'ny 22°C.
Ity fanadihadiana ity dia mitatitra tranga maromaro momba ny famonoana nematode ataon'ny indoles. Zava-dehibe ny manamarika fa ity no tatitra voalohany momba ny methylation izay miteraka iodoindole (dingana vokatry ny fiangonan'ny vacuoles kely izay mifangaro tsikelikely ho vacuoles goavambe, izay mitarika amin'ny fahatapahan'ny fonon'ny sela sy ny fahafatesana) ao anaty fanjaitra kesika, miaraka amin'ny iodoindole izay mampiseho toetra nematicidal manan-danja mitovy amin'ny an'ny nematicide avermectin ara-barotra.
Voalaza teo aloha fa manana asa famantarana maro ao amin'ny prokaryotes sy eukaryotes ny Indoles, anisan'izany ny fanakanana/fiforonan'ny biofilm, ny fahaveloman'ny bakteria, ary ny pathogenicity19,32,33,34. Vao haingana, ny vokatra fitsaboana mety ho azo avy amin'ny indole halogenated, indole alkaloïdes, ary ny indole semisynthetic derivatives dia nahasarika ny fahalianana amin'ny fikarohana lalina35,36,37. Ohatra, ny indole halogenated dia naseho fa mamono ny sela Escherichia coli sy Staphylococcus aureus maharitra37. Ankoatra izany, dia mahaliana ara-tsiansa ny mandalina ny fahombiazan'ny indole halogenated amin'ny karazana, genera, ary fanjakana hafa, ary ity fandalinana ity dia dingana iray mankany amin'ny fanatrarana io tanjona io.
Eto izahay dia manolotra fomba fiasa iray mahatonga ny fahafatesana vokatry ny 5-iodoindole ao amin'ny C. elegans mifototra amin'ny ratra azo averina amin'ny sela (RCI) sy ny methylation (Sary 4C sy 5). Ny fiovana edematous toy ny fivontosana sy ny fahasimban'ny vacuolar dia famantarana ny RCI sy ny methylation, izay miseho amin'ny endrika vacuoles goavambe ao amin'ny cytoplasm48,49. Ny RCI dia manelingelina ny famokarana angovo amin'ny alàlan'ny fampihenana ny famokarana ATP, ka mahatonga ny tsy fahombiazan'ny paompy ATPase, na manelingelina ny fonon'ny sela ary miteraka fidiran'ny Na+, Ca2+, ary rano haingana50,51,52. Ny vacuoles intracytoplasmic dia mipoitra ao amin'ny sela biby vokatry ny fanangonan-drano ao amin'ny cytoplasm noho ny fidiran'ny Ca2+ sy rano53. Mahaliana fa ity fomba fiasa amin'ny fahasimban'ny sela ity dia azo averina raha toa ka vetivety ny fahasimbana ary manomboka mamokatra ATP mandritra ny fotoana voafaritra ny sela, fa raha maharitra na miharatsy ny fahasimbana, dia maty ny sela.54 Ny fandinihanay dia mampiseho fa ny nematodes tsaboina amin'ny 5-iodoindole dia tsy afaka mamerina ny biosynthesis ara-dalàna aorian'ny fiatrehana toe-javatra misy adin-tsaina.
Ny phenotype methylation vokatry ny 5-iodoindole ao amin'ny B. xylophilus dia mety ho vokatry ny fisian'ny iode sy ny fizarana molekiolany, satria ny 7-iodoindole dia tsy dia nisy fiantraikany manakana ny B. xylophilus noho ny 5-iodoindole (Tabilao 1 sy Sary Fanampiny S6). Ireo valiny ireo dia mifanaraka amin'ny fanadihadian'i Maltese et al. (2014), izay nitatitra fa ny fifindran'ny pyridyl nitrogen moiety ao amin'ny indole avy amin'ny para- mankany amin'ny meta-position dia nanafoana ny vacuolization, ny fanakanana ny fitomboana, ary ny cytotoxicity ao amin'ny sela U251, izay manondro fa ny fifandraisan'ny molekiola amin'ny toerana mavitrika manokana ao amin'ny proteinina dia tena ilaina27,44,45. Ny fifandraisana misy eo amin'ny indole na indole halogenated sy ny receptors GluCL hita ato amin'ity fanadihadiana ity dia manohana io hevitra io ihany koa, satria ny 5- sy 2-iodoindole dia hita fa mifamatotra amin'ny receptors GluCL mahery kokoa noho ny indole hafa nodinihina (Sary 6 sy Sary Fanampiny S8). Ny iode eo amin'ny toerana faharoa na fahadimy amin'ny indole dia hita fa mifamatotra amin'ny leucine 218 an'ny receptor GluCL amin'ny alàlan'ny fatorana hidrôzenina hazondamosina, raha toa kosa ny indole halogenated hafa sy ny indole mihitsy no mamorona fatorana hidrôzenina rojo sisiny malemy miaraka amin'ny serine 260 (Sary 6). Noho izany dia heverinay fa ny toerana misy ny halogen dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny famporisihana ny fahasimban'ny vacuolar, raha toa kosa ny fifamatorana mafy amin'ny 5-iodoindole dia mitazona ny fantsona ion ho misokatra, ka mamela ny fidiran'ny ranoka haingana sy ny fahatapahan'ny vacuole. Na izany aza, mbola tsy fantatra ny fomba fiasan'ny 5-iodoindole amin'ny antsipiriany.
Alohan'ny fampiharana ny 5-iodoindole, dia tokony hohadihadiana ny fiantraikany poizina amin'ny zavamaniry. Ny andrana fitsimohan'ny voa nataonay dia naneho fa ny 5-iodoindole dia tsy nisy fiantraikany ratsy teo amin'ny fitsimohan'ny voa na ny dingana fivoarana manaraka tamin'ny fifantohana nodinihina (Sary 7). Noho izany, ity fanadihadiana ity dia manome fototra ho an'ny fampiasana ny 5-iodoindole ao amin'ny tontolo iainana ara-tontolo iainana mba hifehezana ny voka-dratsin'ny nematodes kesika amin'ny hazo kesika.
Ny tatitra teo aloha dia naneho fa ny fitsaboana mifototra amin'ny indole dia maneho fomba fiasa mety handaminana ny olan'ny fanoherana ny antibiotika sy ny fivoaran'ny homamiadana55. Ankoatra izany, ny indole dia manana fiantraikany manohitra ny bakteria, manohitra ny homamiadana, manohitra ny oksidana, manohitra ny fivontosana, manohitra ny diabeta, manohitra ny viriosy, manohitra ny fihanaky ny sela ary manohitra ny tioberkilaozy ary mety ho fototra mampanantena ho an'ny fampivoarana fanafody56,57. Ity fanadihadiana ity dia manolotra voalohany ny mety ho fampiasana ny iode ho toy ny fanafody manohitra ny katsentsitra sy ny bibikely.
Hita telopolo taona lasa izay ny Avermectin ary nahazo ny Loka Nobel tamin'ny taona 2015, ary mbola mitohy ny fampiasana azy ho fanafody famonoana bibikely. Na izany aza, noho ny fivoaran'ny fanoherana ny avermectin amin'ny nematode sy ny bibikely manimba, dia ilaina ny paikady hafa, mora vidy ary sariaka amin'ny tontolo iainana mba hifehezana ny aretina PWN amin'ny hazo kesika. Ity fanadihadiana ity dia mitatitra ihany koa ny fomba famonoana ny nematode kesika amin'ny 5-iodoindole ary ny 5-iodoindole dia manana poizina ambany amin'ny sela zavamaniry, izay manokatra fahafahana tsara ho an'ny fampiharana ara-barotra amin'ny ho avy.
Neken'ny Komitin'ny Etika ao amin'ny Oniversiten'i Yeungnam, Gyeongsan, Korea avokoa ny andrana rehetra, ary natao araka ny torolalana avy amin'ny Komitin'ny Etika ao amin'ny Oniversiten'i Yeungnam ny fomba fiasa.
Natao tamin'ny alalan'ny fomba fiasa efa napetraka43 ny andrana famelomana atody. Mba hanombanana ny tahan'ny famoizana atody (HR), dia nafindra tao anaty lovia Petri misy ny holatra ireo nematode lehibe 1 andro (eo amin'ny 100 vavy sy 100 lahy eo ho eo) ary navela hitombo nandritra ny 24 ora. Avy eo dia navahana ireo atody ary notsaboina tamin'ny 5-iodoindole (0.05 mM sy 0.1 mM) na avermectin (10 μg/ml) ho toy ny fampiatoana ao anaty rano voadio tsy misy fangarony. Ireo fampiatoana ireo (500 μl; eo amin'ny 100 atody eo ho eo) dia nafindra tao anaty lavaka misy takelaka fambolena sela misy lavaka 24 ary notehirizina tamin'ny 22 °C. Natao ny fanisana L2 taorian'ny 24 ora famelomana saingy noheverina ho maty raha tsy nihetsika ireo sela rehefa nohetsehina tamin'ny tariby platinum tsara. Natao tamin'ny dingana roa ity andrana ity, samy nisy famerimberenana enina avy. Natambatra sy naseho ny angon-drakitra avy amin'ireo andrana roa ireo. Kajy toy izao manaraka izao ny isan-jaton'ny HR:
Nodinihina tamin'ny alalan'ny fomba fiasa efa novolavolaina teo aloha ny fahafatesan'ny olitra. Nangonina ny atodin'ny nematoda ary nampifanarahina tamin'ny alalan'ny fandosirana tao anaty rano madio madio ny embryon mba hamoronana olitra dingana L2. Notsaboina tamin'ny 5-iodoindole (0.05 mM sy 0.1 mM) na avermectin (10 μg/ml) ny olitra nampifanarahina (nematoda 500 eo ho eo) ary notezaina tamin'ny takelaka Petri B. cinerea. Rehefa afaka 48 ora niompiana tamin'ny 22 °C, dia nangonina tao anaty rano madio madio ny olitra ary nojerena raha misy dingana L2, L3, ary L4. Ny fisian'ny dingana L3 sy L4 dia naneho fiovan'ny olitra, raha toa kosa ny fisian'ny dingana L2 dia naneho tsy fiovana. Nalaina tamin'ny alalan'ny iRiS™ Digital Cell Imaging System ny sary. Natao tamin'ny dingana roa ity andrana ity, izay samy nisy famerimberenana enina avy. Natambatra sy naseho ny angon-drakitra avy amin'ireo andrana roa ireo.
Nodinihina tamin'ny alalan'ny fitsapana fitsimohan'ny voa tamin'ny takelaka agar Murashige sy Skoog ny poizina ateraky ny 5-iodoindole sy avermectin.62 Nalona tao anaty rano madio madio nandritra ny iray andro aloha ny voa B. oleracea sy R. raphanistrum, nosasana tamin'ny etanôla 1 ml 100%, nodiovina tamin'ny rano madio 1 ml 50% (3% sodium hypochlorite) nandritra ny 15 minitra, ary nosasana indimy tamin'ny rano madio madio 1 ml. Avy eo dia nopotehina teo amin'ny takelaka agar fitsimohan'ny voa izay misy 0.86 g/l (0.2X) Murashige sy Skoog medium ary 0.7% bacteriological agar misy na tsy misy 5-iodoindole na avermectin. Avy eo dia notehirizina tamin'ny 22 °C ny takelaka, ary nalaina sary rehefa afaka 3 andro nitehirizana azy. Natao tamin'ny dingana roa ity fanandramana ity, izay samy naverina in-enina avy.
Fotoana fandefasana: 26 Febroary 2025