Ato amin'ity fandalinana ity, ny fiantraikan'ny fitsaboana mitambatra amin'nympandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry(2,4-D sy kinetin) ary nanoparticles oksida vy (Fe₃O₄-NPs) momba ny morphogenesis in vitro sy ny famokarana metabolite faharoa ao amin'ny *Hypericum perforatum* L. Nodinihina ny fitsaboana nohatsaraina [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] izay nanatsara be dia be ny masontsivana fitomboan'ny zavamaniry: nitombo 59.6% ny haavon'ny zavamaniry, nitombo 114.0% ny halavan'ny fakany, nitombo 180.0% ny isan'ny tsimoka, ary nitombo 198.3% ny lanjan'ny callus vaovao raha oharina amin'ny vondrona fanaraha-maso. Ity fitsaboana mitambatra ity koa dia nanatsara ny fahombiazan'ny famerenana amin'ny laoniny (50.85%) ary nampitombo ny votoatin'ny hypericin tamin'ny 66.6%. Ny fanadihadiana GC-MS dia naneho votoaty hyperoside, β-patholene, ary cetyl alcohol betsaka, izay mitentina 93.36% amin'ny velaran-tany fenolika sy flavonoida manontolo, raha nitombo hatramin'ny 80.1% kosa ny votoatin'ny phenolika sy flavonoida manontolo. Ireo valiny ireo dia manondro fa ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry (PGR) sy ny nanoparticles Fe₃O₄ (Fe₃O₄-NPs) dia misy fiantraikany synergistic amin'ny alàlan'ny famporisihana ny organogenesis sy ny fanangonan'ny singa bioactive, izay maneho paikady mampanantena ho an'ny fanatsarana bioteknolojian'ny zavamaniry fanafody.
Ny karazana St. John (Hypericum perforatum L.), fantatra ihany koa amin'ny hoe karazana St. John, dia zavamaniry maharitra ela ao amin'ny fianakaviana Hypericaceae izay manana lanja ara-toekarena.[1] Ny singa bioactive mety ho azony dia ahitana tannins voajanahary, xanthones, phloroglucinol, naphthalenedianthrone (hyperin sy pseudohyperin), flavonoids, asidra phenolic, ary menaka manitra.[2,3,4] Azo ambolena amin'ny fomba nentim-paharazana ny karazana St. John; na izany aza, ny fizaran-taona amin'ny fomba nentim-paharazana, ny fitsimohan'ny voa ambany, ary ny mora voan'ny aretina dia mametra ny fahafahany mamboly betsaka sy mamorona metabolites faharoa tsy tapaka.[1,5,6]
Noho izany, ny fambolena sela in vitro dia heverina ho fomba mahomby amin'ny fampielezana haingana ny zavamaniry, ny fiarovana ny loharanon-karena germplasm, ary ny fampitomboana ny vokatra azo avy amin'ny fanafody [7, 8]. Ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry (PGR) dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny fandrindrana ny morphogenesis ary ilaina amin'ny fambolena in vitro ny callus sy ny zavamananaina manontolo. Ny fanatsarana ny fifantohana sy ny fitambaran'izy ireo dia tena ilaina amin'ny fahavitan'ireo dingana fampandrosoana ireo [9]. Noho izany, ny fahatakarana ny firafitry ny mpandrindra sy ny fifantohana mety dia zava-dehibe amin'ny fanatsarana ny fitomboana sy ny fahafaha-manavao ny wort St. John (H. perforatum) [10].
Ny nanoparticles vy oksida (Fe₃O₄) dia kilasin'ny nanoparticles izay efa na mbola eo am-pamolavolana ho an'ny fambolena sela. Ny Fe₃O₄ dia manana toetra magnetika manan-danja, mifanaraka tsara amin'ny zavamananaina, ary afaka mampiroborobo ny fitomboan'ny zavamaniry sy mampihena ny adin-tsaina ateraky ny tontolo iainana, ka nahasarika ny sain'ny maro amin'ny famolavolana fambolena sela. Ny fampiharana mety ho azo atao amin'ireo nanoparticles ireo dia mety ahitana ny fanatsarana ny fambolena in vitro mba hampiroboroboana ny fizarazaran'ny sela, hanatsarana ny fandraisana otrikaina, ary hampavitrika ny anzima antioxidant [11].
Na dia naneho fiantraikany tsara teo amin'ny fitomboan'ny zavamaniry aza ny nanoparticles, dia mbola vitsy ny fanadihadiana momba ny fampiharana miaraka ny nanoparticles Fe₃O₄ sy ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry nohatsaraina ao amin'ny *H. perforatum*. Mba hamenoana io banga amin'ny fahalalana io, ity fanadihadiana ity dia nanombana ny vokatry ny fiantraikany mitambatra amin'ny morphogenesis in vitro sy ny famokarana metabolite faharoa mba hanomezana fahatakarana vaovao momba ny fanatsarana ny toetran'ny zavamaniry fanafody. Noho izany, ity fanadihadiana ity dia manana tanjona roa: (1) manatsara ny fifantohana ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry mba hampiroboroboana tsara ny fiforonan'ny callus, ny fanavaozana ny tsimoka, ary ny fakany in vitro; ary (2) manombana ny vokatry ny nanoparticles Fe₃O₄ amin'ny masontsivana fitomboana in vitro. Ny drafitra ho avy dia ahitana ny fanombanana ny tahan'ny fahaveloman'ny zavamaniry nohavaozina mandritra ny fampifanarahana (in vitro). Antenaina fa ny vokatry ny fanadihadiana ity dia hanatsara be dia be ny fahombiazan'ny micropropagation an'ny *H. perforatum*, ka handray anjara amin'ny fampiasana maharitra sy ny fampiharana biotechnologie an'ity zavamaniry fanafody manan-danja ity.
Ato amin'ity fandalinana ity, dia nahazo "explants" ravina avy amin'ny zavamaniry "St. John's wort" isan-taona (zavamaniry reny) izahay. Ireo "explants" ireo dia nampiasaina mba hanatsarana ny fepetra fambolena in vitro. Talohan'ny fambolena, dia nosasana tsara tamin'ny rano madio nandritra ny minitra maromaro ny ravina. Avy eo dia nodiovina tamin'ny rano madio nandritra ny 30 segondra ny velaran'ny "explant", narahin'ny fanitrihana tao anaty vahaolana sodium hypochlorite (NaOCl) 1.5% misy Tween 20 vitsivitsy nandritra ny 10 minitra. Farany, dia nosasana intelo tamin'ny rano madio madio ireo "explants" talohan'ny nafindrana tany amin'ny fitaovana fambolena manaraka.
Nandritra ny efatra herinandro nanaraka, dia norefesina ireo masontsivana momba ny famerenana amin'ny laoniny ny tsimoka, anisan'izany ny tahan'ny famerenana amin'ny laoniny, ny isan'ny tsimoka isaky ny explant, ary ny halavan'ny tsimoka. Rehefa nahatratra ny halavan'ny 2 sm farafahakeliny ny tsimoka vao nohavaozina, dia nafindra tany amin'ny fitaovana famakafakana misy fitaovana MS antsasaky ny hery, asidra indolebutyric (IBA) 0.5 mg/L, ary gum guar 0.3%. Nitohy nandritra ny telo herinandro ny fambolena faka, ary nandritra izany fotoana izany dia norefesina ny tahan'ny faka, ny isan'ny faka ary ny halavan'ny faka. Naverina intelo ny fitsaboana tsirairay, miaraka amin'ny explant 10 novolena isaky ny famerenana, ka nahazoana explant 30 teo ho eo isaky ny fitsaboana.
Norefesina tamin'ny santimetatra (sm) ny haavon'ny zavamaniry tamin'ny fampiasana fitsipika, manomboka amin'ny fotony ka hatrany amin'ny tendron'ny ravina lava indrindra. Norefesina tamin'ny milimetatra (mm) avy hatrany ny halavan'ny fakany rehefa avy nesorina tamim-pitandremana ny zana-kazo sy ny fitaovana fambolena. Nisaina mivantana tamin'ny zavamaniry tsirairay ny isan'ny tsimoka isaky ny zavamaniry. Norefesina tamin'ny maso ny isan'ny teboka mainty eo amin'ny ravina, fantatra amin'ny anarana hoe nodules. Inoana fa fihary misy hypericin, na teboka oxidative, ireo nodules mainty ireo, ary ampiasaina ho toy ny famantarana ara-batana ny fihetsiky ny zavamaniry amin'ny fitsaboana. Rehefa nesorina ny fitaovana fambolena rehetra, dia norefesina tamin'ny alalan'ny mizana elektronika misy fahamarinan'ny miligrama (mg) ny lanjan'ny zana-kazo vaovao.
Toy izao ny fomba fikajiana ny tahan'ny fiforonan'ny callus: rehefa avy namboly explants tao anaty tontolo misy mpandrindra fitomboana isan-karazany (kinases, 2,4-D, ary Fe3O4) nandritra ny efa-bolana, dia isaina ny isan'ny explants afaka mamorona callus. Toy izao ny raikipohy fikajiana ny tahan'ny fiforonan'ny callus:
Naverina intelo ny fitsaboana tsirairay, ary farafahakeliny ditin-kazo 10 no nodinihina isaky ny famerimberenana.
Ny tahan'ny fanavaozana dia maneho ny ampahany amin'ny sela callus izay mahavita soa aman-tsara ny dingan'ny fiforonan'ny tsimoka aorian'ny dingana fananganana callus. Ity mari-pamantarana ity dia mampiseho ny fahafahan'ny sela callus miova ho sela efa niova ary mitombo ho taova vaovao amin'ny zavamaniry.
Ny coefficient de rooting dia ny tahan'ny isan'ny sampana afaka mamaka amin'ny isan'ny sampana rehetra. Io mari-pamantarana io dia maneho ny fahombiazan'ny dingana famakafakana, izay tena ilaina amin'ny fampielezana bitika sy ny fielezan'ny zavamaniry, satria ny famakafakana tsara dia manampy ny zana-kazo ho tafavoaka velona kokoa amin'ny toe-javatra mitombo.
Nalaina tamin'ny methanol 90% ny akora hypericin. Nampiana dimampolo mg ny akora avy amin'ny zavamaniry maina tamin'ny methanol 1 ml ary nojerena nandritra ny 20 minitra tamin'ny 30 kHz tao anaty mpanadio ultrasonic (modely A5120-3YJ) tamin'ny mari-pana ao an-trano tao anaty haizina. Taorian'ny nojerena, dia nojerena tamin'ny 6000 rpm nandritra ny 15 minitra ny santionany. Nangonina ny ranoka avy amin'ny rano, ary norefesina tamin'ny 592 nm ny fidiran'ny hypericin tamin'ny fampiasana spectrophotometer Plus-3000 S araka ny fomba nohazavain'i Conceiçao et al. [14].
Ny ankamaroan'ny fitsaboana amin'ny alalan'ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry (PGR) sy ny nanoparticles oksida vy (Fe₃O₄-NPs) dia tsy niteraka fiforonan'ny nodule mainty teo amin'ny ravin'ny tsimoka nohavaozina. Tsy nisy nodule hita tamin'ireo fitsaboana tamin'ny kinetin 0.5 na 1 mg/L, 0.5 na 1 mg/L, na nanoparticles oksida vy 1, 2, na 4 mg/L. Ny fitambarana vitsivitsy dia naneho fitomboana kely teo amin'ny fivoaran'ny nodule (saingy tsy manan-danja ara-statistika) tamin'ny fifantohana ambony kokoa amin'ny nanoparticles oksida vy kinetin sy/na, toy ny fitambaran'ny 2,4-D (0.5–2 mg/L) miaraka amin'ny kinetin (1–1.5 mg/L) sy nanoparticles oksida vy (2–4 mg/L). Ireo valiny ireo dia aseho amin'ny Sary 2. Ny nodule mainty dia maneho ny fihary manankarena hypericin, izay samy voajanahary sady mahasoa. Ato amin'ity fandalinana ity, ny nodules mainty dia mifandray indrindra amin'ny fiovan'ny lokon'ny sela ho volontany, izay manondro tontolo tsara ho an'ny fanangonan'ny hypericin. Ny fitsaboana amin'ny nanoparticles 2,4-D, kinetin, ary Fe₃O₄ dia nampiroborobo ny fitomboan'ny callus, nampihena ny fiovan'ny loko, ary nitombo ny votoatin'ny chlorophyll, izay manondro ny fanatsarana ny fiasan'ny metabolika sy ny mety ho fampihenana ny fahasimbana oxidative [37]. Ity fandalinana ity dia nanombana ny vokatry ny kinetin miaraka amin'ny nanoparticles 2,4-D sy Fe₃O₄ amin'ny fitomboana sy ny fivoaran'ny callus St. John's wort (Sary 3a–g). Ny fandalinana teo aloha dia naneho fa ny nanoparticles Fe₃O₄ dia manana hetsika antifungal sy antimicrobial [38, 39] ary, rehefa ampiasaina miaraka amin'ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry, dia afaka mandrisika ny rafitra fiarovana ny zavamaniry ary mampihena ny tondro stress sela [18]. Na dia fehezin'ny fototarazo aza ny biosynthesis ny metabolites faharoa, ny vokatra tena izy dia miankina betsaka amin'ny toe-javatra ara-tontolo iainana. Ny fiovan'ny metabolika sy ny morphological dia mety hisy fiantraikany amin'ny haavon'ny metabolite faharoa amin'ny alàlan'ny fanaraha-maso ny fanehoana ny fototarazon'ny zavamaniry manokana sy ny famaliana ny anton-javatra ara-tontolo iainana. Ankoatra izany, ireo mpanentana dia afaka mandrisika ny fampandehanana ireo fototarazo vaovao, izay mandrisika ny asan'ny anzima, amin'ny farany dia mampihetsika ireo lalan'ny biosynthesis maro ary mitarika amin'ny fiforonan'ny metabolites faharoa. Ankoatra izany, fanadihadiana iray hafa no naneho fa ny fampihenana ny alokaloka dia mampitombo ny fiparitahan'ny tara-masoandro, ka mampiakatra ny mari-pana amin'ny antoandro ao amin'ny toeram-ponenana voajanahary ao amin'ny *Hypericum perforatum*, izay mandray anjara amin'ny fitomboan'ny vokatra hypericin. Mifototra amin'ireo angon-drakitra ireo, ity fanadihadiana ity dia nanadihady ny anjara asan'ny nanoparticles vy ho toy ny mpanentana mety amin'ny fambolena sela. Ny valiny dia naneho fa ireo nanoparticles ireo dia afaka mampihetsika ireo fototarazo tafiditra amin'ny biosynthesis hesperidin amin'ny alàlan'ny fanentanana anzima, izay mitarika amin'ny fitomboan'ny fanangonan'ity fitambarana ity (Sary 2). Noho izany, raha ampitahaina amin'ny zavamaniry mitombo amin'ny toe-javatra voajanahary, dia azo lazaina fa ny famokarana fitambarana toy izany in vivo dia azo hatsaraina ihany koa rehefa ampiarahina amin'ny fampandehanana ireo fototarazo tafiditra amin'ny biosynthesis metabolites faharoa ny fihenjanana antonony. Ny fitsaboana mitambatra amin'ny ankapobeny dia misy fiantraikany tsara amin'ny tahan'ny fanavaozana, saingy amin'ny tranga sasany, dia mihena io fiantraikany io. Tsara homarihina fa ny fitsaboana amin'ny 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L kinase, ary fifantohana samihafa dia afaka mampitombo tsy miankina sy be dia be ny tahan'ny fanavaozana amin'ny 50.85% raha oharina amin'ny vondrona fanaraha-maso (Sary 4c). Ireo valiny ireo dia manondro fa ny fitambaran'ny nanohormones manokana dia afaka miasa miaraka mba hampiroboroboana ny fitomboan'ny zavamaniry sy ny famokarana metabolite, izay tena manan-danja amin'ny fambolena sela amin'ny zavamaniry fanafody. Palmer sy Keller [50] dia naneho fa ny fitsaboana 2,4-D dia afaka miteraka tsy miankina amin'ny fiforonan'ny callus ao amin'ny St. perforatum, raha toa kosa ny fanampiana kinase dia nanatsara be ny fiforonan'ny callus sy ny fanavaozana. Izany vokatra izany dia vokatry ny fanatsarana ny fifandanjana hormonina sy ny fanentanana ny fizarazaran'ny sela. Bal et al. [51] dia nahita fa ny fitsaboana Fe₃O₄-NP dia afaka manatsara tsy miankina ny asan'ny anzima antioxidant, ka mampiroborobo ny fitomboan'ny faka ao amin'ny St. perforatum. Nanatsara ny tahan'ny fanavaozana ny zavamaniry rongony ny fampiasana fitaovana fambolena misy nanoparticles Fe₃O₄ amin'ny fifantohana 0.5 mg/L, 1 mg/L, ary 1.5 mg/L [52]. Nanatsara be ny tahan'ny fananganana callus sy faka ny fampiasana nanoparticles kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone, ary Fe₃O₄, na izany aza, mila dinihina ny voka-dratsin'ny fampiasana ireo hormonina ireo amin'ny fanavaozana in vitro. Ohatra, ny fampiasana 2,4-dichlorobenzothiazolinone na kinetin mandritra ny fotoana maharitra na amin'ny fifantohana avo dia mety hiteraka fiovaovan'ny clonal somatic, stress oxidative, morphology callus tsy ara-dalàna, na vitrification. Noho izany, ny tahan'ny fanavaozana avo dia tsy voatery maminavina ny fahamarinan'ny fototarazo. Ny zavamaniry rehetra nohavaozina dia tokony hotombanana amin'ny alàlan'ny marika molekiola (ohatra RAPD, ISSR, AFLP) na fanadihadiana cytogenetic mba hamaritana ny homogeneity sy ny fitoviana amin'ny zavamaniry in vivo [53,54,55].
Ity fanadihadiana ity dia naneho voalohany fa ny fampiasana miaraka ny mpandrindra ny fitomboan'ny zavamaniry (2,4-D sy kinetin) miaraka amin'ny nanoparticles Fe₃O₄ dia afaka manatsara ny morphogenesis sy ny fanangonan'ny metabolites bioactives fototra (anisan'izany ny hypericin sy hyperoside) ao amin'ny *Hypericum perforatum*. Ny fitsaboana nohatsaraina (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) dia tsy vitan'ny hoe nanatsara ny fiforonan'ny callus, ny organogenesis, ary ny vokatra metabolite faharoa fa naneho fiantraikany malefaka ihany koa, izay mety hanatsara ny fandeferan'ny zavamaniry amin'ny stress sy ny lanjan'ny fanafody. Ny fampifangaroana ny nanoteknolojia sy ny kolontsaina sela zavamaniry dia manome sehatra maharitra sy mahomby ho an'ny famokarana fanafody in vitro amin'ny ambaratonga lehibe. Ireo valiny ireo dia manokatra lalana ho an'ny fampiharana indostrialy sy ny fikarohana amin'ny ho avy momba ny mekanisma molekiola, ny fanatsarana ny fatra ary ny fahamarinan'ny fototarazo, ka mampifandray ny fikarohana fototra momba ny zavamaniry fanafody amin'ny bioteknolojia azo ampiharina.
Fotoana fandefasana: 12 Desambra 2025