Ny fanafody anthelmintic N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) dia voalaza fa manakana ny AChE (acetylcholinesterase) ary manana fananana carcinogenic mety hitranga noho ny vascularization tafahoatra. Amin'ity taratasy ity, asehontsika fa ny DEET dia manentana manokana ny sela endothelial izay mampiroborobo ny angiogenesis, ka mampitombo ny fitomboan'ny fivontosana. Ny DEET dia manetsika ny fizotry ny sela mitondra mankany amin'ny angiogenesis, ao anatin'izany ny firoboroboana, ny fifindra-monina ary ny adhesion. Izany dia mifandray amin'ny fitomboan'ny famokarana NO sy ny fanehoana VEGF amin'ny sela endothelial. Ny fampanginana ny M3 na ny fampiasana fanafody M3 amin'ny pharmacological dia nanafoana ireo fiantraikany rehetra ireo, izay nanoro hevitra fa ny angiogenesis vokatry ny DEET dia M3-sensitive. Ny fanandramana mifandraika amin'ny kalsioma famantarana ao amin'ny endothelial sy HEK sela overexpressing M3 receptors, ary koa ny mamatotra sy ny docking fanadihadiana, dia manondro fa ny DEET dia miasa ho toy ny allosteric modulator ny M3 receptors. Ankoatr'izay, ny DEET dia manakana ny AChE, ka mampitombo ny bioavailability ny acetylcholine sy ny famatorana azy amin'ny M3 receptors, ary manatsara ny fiantraikan'ny proangiogenic amin'ny alàlan'ny fitsipika allosterika.
Ny EC voalohany dia natokana tamin'ny aorta amin'ny totozy Soisa. Ny fomba fitrandrahana dia namboarina avy amin'ny protocol Kobayashi 26. Ny Murine ECs dia novolavolaina tao amin'ny media EBM-2 nampian'ny FBS tsy misy hafanana 5% hatramin'ny andalana fahefatra.
Ny vokatry ny fifantohana roa an'ny DEET amin'ny fihanaky ny HUVEC, U87MG, na BF16F10 dia nodinihina tamin'ny fampiasana CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes, C7026). Fohy, sela 5.103 isaky ny lavaka fantsakana no voafafy tao anaty lovia 96 lavadrano, navela hipetaka mandritra ny alina, ary avy eo notsaboina tamin'ny DEET nandritra ny 24 ora. Rehefa avy nesorina ny fitaovam-pitomboana dia asio vahaolana mamatotra loko ny lavadrano tsirairay amin'ny microplate ary atsipazo ireo sela amin'ny 37 ° C mandritra ny 30 minitra. Ny haavon'ny fluorescence dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny mpamaky microplate multimode Mithras LB940 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Alemana) misy sivana 485 nm sy sivana emission 530 nm.
Ny HUVEC dia nafafy tamin'ny takelaka 96-lavaka amin'ny hakitroky ny sela 104 isaky ny lavadrano. Ny cellule dia notsaboina tamin'ny DEET nandritra ny 24 ora. Ny fahavitan'ny sela dia nodinihina tamin'ny fampiasana colorimetric MTT assay (Sigma-Aldrich, M5655). Ny sandan'ny hakitroky optika dia azo tamin'ny mpamaky microplate multimode (Mithras LB940) amin'ny halavan'ny onjam 570 nm.
Ny vokatry ny DEET dia nodinihina tamin'ny fampiasana ny angiogenesis in vitro. Ny fitsaboana amin'ny 10-8 M na 10-5 M DEET dia nampitombo ny fananganana ny halavan'ny capillary amin'ny HUVECs (sary 1a, b, bara fotsy). Raha ampitahaina amin'ny vondrona mpanara-maso, ny fitsaboana amin'ny fifantohana amin'ny DEET manomboka amin'ny 10-14 ka hatramin'ny 10-5 M dia nampiseho fa ny halavan'ny capillary dia nahatratra lembalemba amin'ny 10-8 M DEET (sary fanampiny S2). Tsy nisy fahasamihafana lehibe hita tamin'ny fiantraikan'ny proangiogenic in vitro an'ny HUVEC tsaboina amin'ny DEET amin'ny fifantohana amin'ny 10-8 M sy 10-5 M.
Mba hamaritana ny fiantraikan'ny DEET amin'ny neovascularization, dia nanao fandalinana neovascularization in vivo izahay. Taorian'ny andro 14, ny totozy voatsindrona amin'ny sela endothelial efa voaomana amin'ny 10-8 M na 10-5 M DEET dia nampiseho fitomboana lehibe amin'ny votoatin'ny hemoglobinina (sary 1c, bara fotsy).
Ankoatr'izay, ny neovascularization nateraky ny DEET dia nodinihina tao amin'ny U87MG xenograft-bearing totozy izay nampidirina isan'andro (ip) miaraka amin'ny DEET amin'ny doka fantatra amin'ny fampidiran-dra ao amin'ny plasma 10-5 M, izay mahazatra amin'ny olona mibaribary. ao amin'ny 23. Ny fivontosana azo tsapain-tanana (izany hoe ny fivontosana>100 mm3) dia voamarika 14 andro taorian'ny nidiran'ny sela U87MG tao anaty totozy. Tamin'ny andro 28, ny fitomboan'ny tumor dia nitombo be tamin'ny totozy voatsabo DEET raha oharina amin'ny totozy fanaraha-maso (sary 1d, efamira). Fanampin'izay, ny fandotoana ny fivontosana CD31 dia naneho fa ny DEET dia nampitombo be ny faritry ny kapilara fa tsy ny hakitroky ny microvessel. (sary 1e–g).
Mba hamaritana ny anjara asan'ny muscarinic receptors amin'ny fihanaky ny DETA-induced, 10-8 M na 10-5 M DETA eo anatrehan'ny pFHHSiD (10-7 M, antagonista mpikatroka M3 mifantina) dia nampiasaina. Fitsaboana ny HUVEC. Ny pFHHSiD dia nanakana tanteraka ny fananan'ny DETA amin'ny fifantohana rehetra (Table 1).
Ao anatin'ireo fepetra ireo, dia nandinika ihany koa izahay raha hampitombo ny halavan'ny kapila ao amin'ny sela HUVEC ny DEET. Toy izany koa, ny pFHHSiD dia nanakana ny halavan'ny capillary vokatry ny DEET (sary 1a, b, bara fotsy). Ankoatr'izay, ny fanandramana mitovy amin'izany dia natao tamin'ny M3 siRNA. Na dia tsy nahomby aza ny fanaraha-maso siRNA tamin'ny fampiroboroboana ny fananganana kapilara, ny fampanginana ny mpitsabo muscarinic M3 dia nanafoana ny fahafahan'ny DEET hampitombo ny halavan'ny capillary (sary 1a, b, bara mainty).
Ankoatra izany, ny 10-8 M na 10-5 M DEET-induced vascularization in vitro sy ny neovascularization in vivo dia voasakana tanteraka tamin'ny pFHHSiD (sary 1c, d, faribolana). Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny DEET dia mampiroborobo ny angiogenesis amin'ny alàlan'ny lalana mora amin'ny antagonista mpikatroka M3 na M3 siRNA.
AChE no tanjona molekiola ny DEET. Ny zava-mahadomelina toy ny donepezil, izay miasa toy ny AChE inhibitors, dia afaka mandrisika ny EC angiogenesis in vitro sy amin'ny models ischemia hindlimb amin'ny totozy14. Nosedrainay ny fiantraikan'ny fatran'ny DEET roa amin'ny asan'ny enzyme AChE ao amin'ny HUVEC. Ny fihenan'ny DEET ambany (10-8 M) sy avo (10-5 M) dia nihena ny asan'ny AChE endothelial raha oharina amin'ny fepetra mifehy (sary 2).
Samy mampihena ny asan'ny acetylcholinesterase amin'ny HUVEC ny fatran'ny DEET (10-8 M sy 10-5 M). BW284c51 (10-5 M) dia nampiasaina ho fanaraha-maso ny acetylcholinesterase inhibitors. Ny vokatra dia aseho amin'ny isan-jaton'ny hetsika AChE amin'ny HUVEC voatsabo miaraka amin'ny fatran'ny DEET roa raha oharina amin'ny sela voatsabo amin'ny fiara. Ny soatoavina dia aseho ho mean ± SEM amin'ny andrana tsy miankina enina. * p <0.05 raha oharina amin'ny fanaraha-maso (Kruskal-Wallis sy Dunn fitsapana fampitahana maromaro).
Nitric oxide (NO) dia tafiditra ao amin'ny dingana angiogenic 33, noho izany, TSY famokarana amin'ny DEET-stimulated HUVECs no nianatra. Ny famokarana NO endothelial NO voatsabo DEET dia nitombo raha oharina amin'ny sela fanaraha-maso, saingy tsy nisy dikany afa-tsy tamin'ny dosie 10-8 M (sary 3c). Mba hamaritana ny fiovan'ny molekiola mifehy ny famokarana NO vokatry ny DEET, ny fanehoana sy ny fampahavitrihana eNOS dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny blotting tandrefana. Na dia tsy nanova ny fitenin'ny eNOS aza ny fitsaboana DEET, dia nitombo be ny phosphorylation eNOS tao amin'ny tranokalan'ny fampahavitrihana azy (Ser-1177) raha nampihena ny toerana misy azy (Thr-495) raha oharina amin'ny sela tsy voatsabo ao amin'ny eNOS phosphorylation (sary 3d). Fanampin'izany, ny tahan'ny eNOS phosphorylated amin'ny toerana fampahavitrihana sy ny toerana manakana dia nokajiana taorian'ny nanara-maso ny habetsahan'ny eNOS phosphorylated amin'ny totalin'ny enzyme. Io tahan'ny io dia nitombo be tamin'ny HUVEC voatsabo amin'ny fifantohana tsirairay avy amin'ny DEET raha oharina amin'ny sela tsy voatsabo (sary 3d).
Farany, ny fanehoana ny VEGF, iray amin'ireo antony lehibe proangiogenic, dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny famafazana tandrefana. Ny DEET dia nampitombo be ny fanehoana VEGF, fa ny pFHHSiD kosa dia nanakana tanteraka an'io fomba fiteny io.
Satria ny fiantraikan'ny DEET dia saro-pady amin'ny fanakanana pharmacologique sy ny fampihenan'ny M3 receptors, dia nanandrana ny fiheverana fa ny DEET dia mety hanatsara ny famantarana ny calcium. Mahagaga fa tsy nahavita nampitombo ny calcium cytoplasmic ny DEET tao amin'ny HUVEC (data tsy aseho) sy HEK / M3 (sary 4a, b) ho an'ny fifantohana roa ampiasaina.
Fotoana fandefasana: Dec-30-2024